天然虫草对小鼠脾脏影响的组织化学和免疫细胞化学的观察

本文将30只成年雄性小鼠分为实验组和对照组。 实验组每天给予冬虫夏草溶液一次,共7天 对照组每天给予生理盐水一次。 按时处死动物,取脾脏进行组织化学和免疫细胞化学染色。
&nbsp。&nbsp。&nbsp。资料来源:中国组织化学和细胞化学杂志
。&nbsp。&nbsp。作者:葛振华、周帆、黄守雄、王若愚(福建中医学院)
& nbsp;&nbsp。&nbsp。本文将30只成年雄性小鼠分为实验组和对照组。 实验组每天给予冬虫夏草溶液一次,共7天 对照组每天给予生理盐水一次。 按时处死动物,取脾脏进行组织化学和免疫细胞化学染色。 结果表明:(1)冬虫夏草组脾脏白髓成分增加,生发中心明显,脾嗜细胞增多 显微分光光度计结果表明,冬虫夏草组小鼠脾脏dna含量高于对照组,表明冬虫夏草能促进小鼠脾脏rn a和dn a的合成 (2)冬虫夏草组脾脏igg+和igm+浆细胞显著增加,边缘区变宽。冬虫夏草可以促进抗体的形成 此外,本实验还证明两组小鼠脾脏中巨噬细胞的数量没有明显差异。
&nbsp。&nbsp。&nbsp。为探讨天然冬虫夏草对机体免疫功能及其他方面的影响,采用组织化学和免疫细胞化学方法对饲喂冬虫夏草水剂的小鼠脾脏进行了观察,这方面的工作尚未见报道。
&nbsp。&nbsp。&nbsp。材料和方法:
。&nbsp。&nbsp。一、动物:30只纯icr雄性小鼠,体重18~ 22g,购自上海计划生育研究所 实验组20只大鼠每天服虫草水剂一次,每次100mg /0。7天内每次5ml 对照组10只大鼠给予0。每天一次5ml生理盐水,持续7天。 7天后,处死动物,取出脾脏,分别固定在卡诺氏溶液、10%甲醛乙酸溶液和甲醛钙固定液中。 用卡诺氏溶液和甲醛乙酸固定的样品像往常一样脱水并包埋在石蜡中。在4℃下放置24小时后,用甲醛钙固定的组织转移到蔗糖明胶溶液中,并在4℃下保存冷冻切片。 切片厚度为5 m 为观察冬虫夏草对巨噬细胞的影响,每组5只小鼠注射0。死亡前1小时,通过尾静脉注射3毫升印度墨水(浓度16毫克/毫升),将它们脾脏的1 /4固定在4%甲醛中,脱水、包埋并切片,厚度为5 m
&nbsp。&nbsp。&nbsp。二.试剂:生物素标记的山羊抗鼠抗体和igg抗体及abc试剂盒均为vecto r实验室公司生产 Dab是奥尔德里奇公司,萘酚乙酸as-bi磷酸盐是西格玛公司,印度油墨是英国施密德产品。
&nbsp。&nbsp。&nbsp。第三,用弗氏法染色dn a,用中国中医科学院mpv-2显微分光光度计定量测定两组小鼠脾脏中的红、白髓细胞dn a,并进行统计学处理。 加鲁-帕洛诺宁法显示dn a和rn a。 免疫细胞化学按照abc直接法进行:冰冻切片,粘附在明胶处理过的载玻片上,用丙酮固定5min,加入ph7的PBS。4持续5分钟,然后加入0。3% &nbsp。H2O 2 H2O 2 10分钟,自来水冲洗后PBS 20分钟,生物素标记的山羊抗鼠igg或igm (1∶150)除去多余液体后,室温孵育1。5h,pbs洗涤,ABC 1∶100混合溶液,室温下45分钟;pbs洗涤后,加入dab混合溶液(3毫克dab+10毫升PBS+40±13% H2O 2)10 ~ 15分钟,水洗5分钟,常规脱水透明,用树胶包裹 照片中,用正常的羊血清代替抗体,其他步骤同上。 非特异性酯酶和碱性磷酸酶按照hsu法进行。 结果表明,巨噬细胞被注射墨汁的小鼠脾脏固定,脱蜡后密封,he染色进行大体形态学观察。
&nbsp。&nbsp。&nbsp。结果
&nbsp。&nbsp。&nbsp。染色切片中,冬虫夏草组白髓面积大于对照组,脾小体较大,生发中心明显。 分裂期在生发中心很常见。 两组脾脏dn a的定量检测结果表明,冬虫夏草组红骨髓和白骨髓dn a含量高于对照组,两组差异有显著性。
&nbsp。&nbsp。&nbsp。甲基强的松龙染色显示冬虫夏草组脾脏中存在较多的降钙素成瘾细胞,如生发中心的淋巴母细胞、边缘区的B细胞、脾索的浆细胞和淋巴细胞等。细胞质中含有降钙素颗粒。 另外,巨核细胞的细胞质被庇隆蛋白染色 上述反应均比对照组明显。
&nbsp。&nbsp。&nbsp。免疫细胞化学染色显示冬虫夏草组小鼠脾脏中igg+和igm+浆细胞数量较对照组显著增加,浆细胞常聚集在脾索或血窦周围 脾小体细胞对igg反应微弱,但虫草组igg+ b细胞仍高于对照组。两组对igm的反应差异更为显著 冬虫夏草髓内红、白冬虫夏草组除igm+浆细胞增多外,边缘区igm+ b细胞和脾小体也明显增多,导致冬虫夏草组小鼠边缘区变宽,脾小体增大,igm反应增强
&nbsp。&nbsp。&nbsp。碱性磷酸酶+细胞主要是分布在边缘区域的B细胞,在生发中心和红骨髓中很少见到碱性磷酸酶+细胞 此外,血管内皮也呈阳性反应 两组小鼠脾边缘区alp+细胞无显著差异 ae+ t细胞主要分布在动脉周围的淋巴鞘中,少数ae+细胞也分布在红骨髓中。
&nbsp。&nbsp。&nbsp。吞噬墨汁的巨噬细胞在对照组中主要位于小脾细胞的外围边缘区,而红骨髓则很少见。 冬虫夏草组红髓和动脉周围淋巴鞘中巨噬细胞增多,边缘面积减少,但两组间巨噬细胞数量无显著差异。
&nbsp。&nbsp。&nbsp。在
&nbsp。&nbsp。&nbsp。一、冬虫夏草对小鼠脾脏rn a和dn a的影响:
。&nbsp。&nbsp。有人指出冬虫夏草能加速小鼠脾脏核酸和蛋白质的更新,增加rn a含量,增强蛋白质代谢。 本研究进一步证明,冬虫夏草组除脾脏白髓面积增加外,部分淋巴细胞和浆细胞中降钙素颗粒的数量也增加,红髓和白髓中dn a的含量也高于对照组。白骨髓dn a含量的增加可能与细胞分裂和增殖有关,而红骨髓dn a含量的增加可能与单位面积细胞密度(浆细胞和淋巴细胞)的增加有关。
&nbsp。&nbsp。&nbsp。第二,冬虫夏草对小鼠脾脏免疫反应的影响
& nbsp;&nbsp。&nbsp。过去有报道称冬虫夏草和拟青霉对小鼠体液免疫和细胞免疫没有影响,甚至对抗体形成细胞有抑制作用。 然而,我们的实验证明冬虫夏草组脾脏中的igg+和igm+浆细胞增多,这些细胞通常分布在脾索或血窦周围。我们认为这种现象可能有助于分泌的抗体尽快释放到血液循环中,从而产生免疫反应。 另一个特征是冬虫夏草组小鼠脾脏边缘区和脾小体中igm+ b细胞的增加,特别是边缘区的B细胞的增加更具免疫学意义,因为该区的B细胞是抗体产生的前体细胞,具有免疫活性。 虽然边缘区的B细胞和脾小体都可以与igm抗体发生反应,但它们与碱性磷酸酶不同,表明两者是不同的B细胞亚群。 冬虫夏草组脾边缘区igm+ b细胞增加时,碱性磷酸酶细胞没有相应增加,与对照组相比无显著差异。 这表明边缘区igm+细胞中有一些碱性磷酸酶细胞。提示碱性磷酸酶不是所有B细胞的共同特征,而只是浆细胞前体细胞的标志,反映了边缘区的B细胞处于不同的分化阶段。
&nbsp。&nbsp。&nbsp。虽然有报道称冬虫夏草能增强小鼠脾脏的细胞免疫功能,但我们的结果表明冬虫夏草组ae+ t细胞没有明显增加。此外,ae是非特异性的,这进一步增加了结果评估的难度。
&nbsp。&nbsp。&nbsp。三.冬虫夏草对巨噬细胞的影响
。&nbsp。&nbsp。以往的研究证明冬虫夏草不仅能增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬活性,还能促进脾巨噬细胞的增殖 我们的结果不支持后一个结论。 我们观察到两组之间脾脏中巨噬细胞的数量相似。不同之处在于冬虫夏草边缘区巨噬细胞减少,动脉周围红髓和淋巴鞘增加。 这种现象可能是边缘区域的一些巨噬细胞向淋巴细胞呈现抗原,导致局部淋巴组织增殖。 此外,我们的实验还证明小鼠脾脏中的巨噬细胞具有功能异质性,例如吞噬墨水的巨噬细胞位于边缘区,而不能吞噬墨水的巨噬细胞位于红骨髓,这与ko tani等人的报告一致。 humphery和grennan的实验也证明了边缘区和红髓中的巨噬细胞具有功能异质性,例如边缘区巨噬细胞选择性吞噬中性多糖,而红髓中的巨噬细胞选择性吞噬酸性多糖 Vliet等人还证实,小鼠脾小体的外周区域存在独特的巨噬细胞亚群,这与其他部位不同。 冬虫夏草对小鼠脾脏dn a、rn a和免疫球蛋白合成的影响可能是非特异性免疫刺激的结果,因为冬虫夏草含有多种氨基酸和多糖,具有多种功能,其作用机制有待进一步研究。
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