冬虫夏草对庆大霉素抗菌效力的影响

本文采用高效液相色谱法分析了天然冬虫夏草中总糖、氨基酸、游离脂肪酸等成分的含量。观察庆大霉素肌肉注射冬虫夏草血清和冬虫夏草溶液对庆大霉素抗菌疗效的影响。

用高效液相色谱法分析了天然冬虫夏草中总糖、氨基酸和游离脂肪酸的含量。观察庆大霉素肌肉注射联合冬虫夏草血清和冬虫夏草溶液对大鼠庆大霉素抗菌疗效的影响。 结果表明,冬虫夏草在成分和比例上含有与人体相似的氨基酸和微量元素。 庆大霉素肌肉注射和含冬虫夏草血清在大鼠体内的应用以及冬虫夏草溶液本身对庆大霉素杀灭大肠杆菌或铜绿假单胞菌的效果均无明显影响。 因此,应用冬虫夏草防治氨基糖苷类药物肾毒性损伤不会影响氨基糖苷类药物本身的疗效

氨基糖苷类抗生素是临床治疗严重感染的主要抗菌药物之一,但肾毒性一直阻碍着该药物的应用。 据报道,目前临床上约10%的急性肾衰竭与氨基糖苷类药物有关。 通过动物实验和临床研究,证明冬虫夏草能降低氨基糖苷类药物的肾毒性,为临床防治药物肾毒性急性肾损伤提供了新的有效措施。 然而,冬虫夏草是否能降低氨基糖苷类药物的肾毒性,同时影响氨基糖苷类药物的抗菌疗效?本实验对此进行了观察,并对冬虫夏草的药物成分进行了初步分析。

实验材料

(1)大肠杆菌是世卫组织保留菌株,由我院菌室提供。

(2)铜绿假单胞菌是我院细菌室提供的一种保留菌株。

(3)江苏连云港东风制药厂生产的医用硫酸庆大霉素注射密封胶。

(4)天然冬虫夏草,市售真正的天然冬虫夏草,经过反复水提和醇提,最后合并提取液浓缩至0.2g(生药)/ml

(5)江西国家制药厂人工虫草注射剂,2g(生药)/ml浓度

(6) sd雌鼠体重150克、10克,由我院动物室提供。

方法和步骤

(1)冬虫夏草提取物中总糖含量的测定:蒽酮-乙酸乙酯显色法;葡萄糖含量:7105自动生化分析,氨基酸组成:高效液相色谱分析;游离脂肪酸含量:高效液相色谱法分析;甘醉酒含量:气相色谱分析;Cu2+、zn 2+、fe2+、ca2+:原子吸收光谱法。

(2)体外杭州细菌试验,取18只无菌试管,分为三组 组:天然虫草+庆大霉素;乙组:人工虫草+庆大霉素;丙组:庆大霉素单独使用 庆大霉素原液稀释后,将冬虫夏草加入各组。每个试管接种一定量的大肠杆菌溶液。将混合物混合均匀,在37℃培养72小时。培养液的浊度为细菌生长。同时,增设4个试管,低浓度庆大霉素(2.08毫克/升)+高浓度人工或天然冬虫夏草(20毫克/升) (各2个试管)。分别接种大肠杆菌和铜绿假单胞菌观察细菌生长情况 结果表明,培养基浊度为细菌生长。

(3)血清灭菌试验脸
1、血清采集:将6只体重分别为150克和10克的sd雌性大鼠分为三组。i/d x 4天腹腔注射庆大霉素2 0 mg/kg。组(天然冬虫夏草组)同时饲喂1 g/ g天然冬虫夏草,每日1次;乙组(人工虫草组)给予人工虫草4 g/ kg,l/d;对照组每天给予2 ml饮用水 在用药1天后的第4和第24小时以及用药4天后的第8和第24小时采血,并分离血清。

2、血清灭菌试验:取2 4只无菌试管,分别接种大肠杆菌和铜绿假单胞菌(各12只)。然后将不同时间的三组大鼠的0.5毫升血清分别加入到每个试管中,在37℃培养72 h 培养液的浊度为细菌生长。

结果

(1)、虫草成分

1总糖和葡萄糖含量:0.2 g /ml,天然冬虫夏草提取物总糖含量为366mmol/l,相当于天然冬虫夏草药材的3.3%,葡萄糖占总糖含量的39%

2氨基酸组成和含量:浓度为0.2 g(生药)/ml的天然冬虫夏草提取物中的氨基酸组成和含量。

3.游离脂肪酸组成和含量:浓度为0.2g(生药)/ml的天然冬虫夏草提取物中游离脂肪酸的组成和含量。

4.甘醇含量:0.2 g(生药)/ml天然虫草提取物含甘醇25.12 g/ l,相当于天然虫草生药的12.56%

5.cu2+、zn2+、fe2+、ca2+含量:0.2g(生药)/m l天然虫草提取物含有c u2+ 2 mol/l、zn2 +22.2 mol/l、fe2+15.8 mol/l、Ca2+1.55mol/l

(2)、体外实验结果表明庆大霉素浓度从33.3毫克/升降至4.16毫克/升,可有效抑制大肠杆菌的生长 当浓度降低到2.0 8毫克/升时,大肠杆菌的生长不能被抑制 当庆大霉素抗菌与人天然或人工冬虫夏草一起加入时,当庆大霉素浓度为2.08毫克/升时,仍能有效抑制大肠杆菌的生长

大肠杆菌和绿脓杆菌都不能在低浓度庆大霉素(2.08毫克/升)和高浓度冬虫夏草(10毫克/升)的培养基中生长。

(3)、血清杀菌试验结果:三组大鼠的血清在用药1天后的第4小时和第24小时对大肠杆菌有良好的。

抑制作用 对于铜绿假单胞菌,第4h时三组血清都能抑制其生长,而第24h时天然虫草组血清只能有效抑制其生长,而人工虫草组和对照组不能抑制铜绿假单胞菌的生长。

给药4天后,三组大鼠的血清在第8小时和第24小时对大肠杆菌有抑制作用,第24小时的血清也对大肠杆菌有抑制作用。

讨论

(一)冬虫夏草对庆大霉素杭州菌的作用冬虫夏草是一种传统的壮阳补虚药物,其主要成分为多糖、氨基酸、脂肪酸、甘酒精和多种微量元素 `它能调节增强机体细胞和体液免疫功能,增强吞噬细胞的吞噬能力,刺激淋巴细胞转化,对葡萄球菌、链球菌、炭疽杆菌等有抑制作用。 研究表明,冬虫夏草增强免疫功能和抗菌功能的有效成分是多糖和甘醇等。 实验结果表明,当庆大霉素体外浓度为33.3-4.16毫克/升时,能有效抑制大肠杆菌的生长 当浓度降至2.08毫克/升时,大肠杆菌不能被抑制。同时,添加天然或人工冬虫夏草(5毫克/升)后,庆大霉素浓度降至2.08毫克/升,仍能有效抑制大肠杆菌。 大鼠给药1天后的第4h血清,无论是庆大霉素单独组、天然虫草组还是人工虫草组,对大肠杆菌和铜绿假单胞菌均有良好的抑制作用。第3h大鼠血清对大肠杆菌有抑制作用,但只有天然虫草组血清对铜绿假单胞菌有抑制作用。 第3组大鼠给药4天后24h血清能有效抑制大肠杆菌和铜绿假单胞菌的生长 这表明冬虫夏草和庆大霉素的同时应用不会减弱或拮抗庆大霉素的抗菌效应,但也可能增强庆大霉素的//k51/]效应,尤其是天然冬虫夏草。 人工冬虫夏草和庆大霉素给药4天后第8小时,血清对铜绿假单胞菌无抑制作用,这被认为是实验误差。

(2)冬虫夏草对庆大霉素的作用意义杭州细菌氨基糖苷类抗生素仍是临床治疗革兰氏阴性菌感染的主要药物 但与此同时,肾毒性问题极大地限制了其应用。 近年来,尿n-a-g酶 这种检测方法可以在早期检测氨基糖苷类药物引起的肾毒性损伤的发生,但目前还没有可靠有效的方法来预防和治疗氨基糖苷类药物引起的肾毒性损伤。 我们最近的动物实验和临床研究发现,冬虫夏草能有效减少氨基糖苷类抗生素引起的肾损伤,稳定肾小管上皮细胞溶酶体膜,改善肾小管离子转运功能,促进肾小管上皮细胞的再生和修复。 冬虫夏草和庆大霉素的协同应用不仅可以降低肾毒性,而且不影响庆大霉素的血药浓度和庆大霉素的抗菌疗效。同时,其天然合理的氨基酸、游离脂肪酸、微量元素等成分对人体有很好的滋补作用,值得在今后的临床工作中推广应用,特别是在老年和重度肾中毒患者中

冬虫夏草的疗效成分仍不清楚。 据报道甘氨基酸、游离脂肪酸、腺苷、甘醇化物对缺血性急性肾衰竭具有一定的预防和治疗作用。 然而,单独使用的剂量大大超过了冬虫夏草这些成分的含量。冬虫夏草是通过这些成分的组合还是其他成分的组合还有待研究。